UN SISTEMA EFICIENTE DE TRANSFORMACIÓN GENÉTICA EN LENTEJA (Lens culinaris MEDIK) MEDIADO POR AGROBACTERIUM.

Autores/as

  • Carolina Bermejo
  • Gustavo Rodríguez
  • Ileana Gatti
  • Enrique Cointry

Palabras clave:

Agrobacterium tumefaciens, nudo cotiledonar, Lens culinaris Medik, transformación estable.

Resumen

Hasta la fecha, la frecuencia de transformación en lenteja (Lens culinaris Medik) es baja. Por lo tanto, el objetivo principal de este estudio fue optimizar un sistema de regeneración in vitro compatible con una transformación mediada por Agrobacterium y establecer la mejor concentración de antibióticos que permita la selección de plantas transformadas, para desarrollar plantas de lentejas transgénicas con mayor eficiencia. Los explantes de nudos cotiledonales se transformaron con la cepa GV2260 de Agrobacterium tumefaciens que contiene el vector binario pBI121 con genes de neomicina fosfotransferasa (npt-II) y ?-glucuronidasa (gus). Un régimen de selección continua con 50 mg L?1 de kanamicina fue eficaz para el desarrollo de transformantes, ya que no afectó la regeneración de tallos y raíces en la mayoría de los explantes y no se observaron emisiones. La integración y expresión estable de los transgenes en el genoma de lenteja se confirmaron mediante análisis de PCR y ensayo histoquímico para la actividad enzimática de la ?-glucuronidasa (GUS). La herida de los explantes, el uso de un protocolo de regeneración in vitro optimizado, la aplicación de una alta concentración de acetosiringona y la densidad bacteriana fueron importantes para lograr una alta frecuencia de transformación. Los tallos de lenteja transgénicos se produjeron con una frecuencia global del 7%.

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Publicado

15-08-2019